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食用植物油是我們?nèi)粘Ｉ钪械氖巢?，而其核心成分甘油三酯能直接影響油的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值、穩(wěn)定性和風(fēng)味。近年來，隨著人們對(duì)食品質(zhì)量與安全的關(guān)注日益提升，對(duì)食用油中甘油三酯組成的精準(zhǔn)分析顯得尤為重要。2024年發(fā)布的《GB/T 44614-2024 糧油檢驗(yàn) 植物油中甘油三酯組成的測(cè)定 高效液相色譜法》，為油脂成分分析提供了技術(shù)依據(jù)。

本文依據(jù)GB/T 44614-2024，采用高效液相色譜(HPLC)-蒸發(fā)光散射檢測(cè)(ELSD)/質(zhì)譜(MS)聯(lián)用技術(shù)，結(jié)合市售植物油實(shí)例，對(duì)甘油三酯進(jìn)行分析及等效碳數(shù)（ECN）鑒定。

一、為何選擇HPLC-ELSD方法分析甘油三酯？

甘油三酯不具有紫外吸收或熒光特性，傳統(tǒng)UV檢測(cè)器檢測(cè)靈敏度低。而ELSD檢測(cè)器對(duì)非揮發(fā)性物質(zhì)具有高靈敏度，且響應(yīng)值與樣品濃度呈對(duì)數(shù)關(guān)系，非常適合甘油三酯這類化合物的檢測(cè)。此外，HPLC能夠?qū)崿F(xiàn)復(fù)雜混合物中不同甘油三酯的有效分離，結(jié)合等碳數(shù)規(guī)則，可對(duì)樣品中不同碳鏈長(zhǎng)度的甘油三酯進(jìn)行歸類與識(shí)別。因此，HPLC-ELSD成為分析甘油三酯組成的常用方法。

二、甘油三酯ECN的質(zhì)譜鑒定

甘油三酯的ECN是綜合其碳鏈長(zhǎng)度與不飽和度的關(guān)鍵參數(shù)，決定了其在反相LC中的洗脫順序。利用LC-MS進(jìn)行ECN評(píng)價(jià)，首先通過LC根據(jù)ECN值對(duì)復(fù)雜樣品中的甘油三酯同分異構(gòu)體進(jìn)行高效分離，進(jìn)而通過MS準(zhǔn)確測(cè)定各色譜峰對(duì)應(yīng)甘油三酯的分子量與碎片信息，實(shí)現(xiàn)對(duì)其碳原子總數(shù)（CN）和雙鍵數(shù)（n）的精準(zhǔn)鑒定。

三、實(shí)驗(yàn)方法

根據(jù)GB/T 44614-2024《糧油檢驗(yàn)，植物油中甘油三酯組成的測(cè)定，高效液相色譜法》方法分析。實(shí)驗(yàn)儀器為配置ELSD檢測(cè)器的依利特EClassical 3200L UHPLC系統(tǒng)和MS2 Vertical 9100液質(zhì)聯(lián)用儀。

色譜條件色譜柱：SinoPak C18 (4.6 × 250 mm, 5 μm，訂貨號(hào)：31110109)

流動(dòng)相：異丙醇（A）與乙腈（B），梯度洗脫

流動(dòng)相梯度：0-14 min 20% A，14-35 min 20-70% A， 35-40 min 70-20% A，40-50 min 20% A

流速：1.2 mL/min進(jìn)樣體積：10 μL

柱溫：45℃

蒸發(fā)光檢測(cè)器參數(shù)：蒸發(fā)溫度80℃，霧化溫度55℃，載氣流量2.5 L/min

質(zhì)譜參數(shù)離子源模式：正離子模式（APCI+）

采集范圍(m/z)：300~1050

四、結(jié)果與討論

甘油三酯是天然植物油中的主要成分，花生油中的甘油三酯含量約為98%，大豆油約為97.9%，菜籽油約為96.8%，玉米油約為95.8%，橄欖油則為93.3%?；ㄉ椭懈视鸵货ァ⒍ズ枯^低，而甘油三酯含量較高。因此通常檢測(cè)的是甘油三酯的含量。

1、植物油樣品中甘油三酯的分析

在文中所示色譜條件下，大豆油和花生油分別與油酸甘油三酯標(biāo)準(zhǔn)溶液以及甘油三酯混標(biāo)溶液的疊加色譜圖如圖1和圖2所示，顯示出良好的分離。

圖1. 大豆油樣品與油酸甘油三酯標(biāo)液以及甘油三酯的混標(biāo)溶液的疊加色譜圖

圖2. 花生油樣品與油酸甘油三酯標(biāo)液以及甘油三酯混標(biāo)溶液的疊加色譜圖

甘油三酯是天然植物油中的主要成分，花生油中的甘油三酯含量約為98%，大豆油約為97.9%，菜籽油約為96.8%，玉米油約為95.8%，橄欖油則為93.3%?；ㄉ椭懈视鸵货?、二酯含量較低，而甘油三酯含量較高。因此通常檢測(cè)的是甘油三酯的含量。

2、甘油三酯的等效碳數(shù)的質(zhì)譜鑒定

食用油的主要成分為三脂肪酸甘油酯（又稱甘油三酯），其結(jié)構(gòu)由一分子甘油與三分子脂肪酸通過酯化反應(yīng)形成。甘油骨架具有明確的手性結(jié)構(gòu)，其中三個(gè)羥基分別位于sn-1、sn-2和sn-3位。在天然油脂中，sn-2位通常連接不飽和脂肪酸，而sn-1和sn-3位多連接飽和脂肪酸。根據(jù)脂肪酸在甘油骨架上的分布差異，甘油三酯可分為三種類型：aaa型、aab型（包括aab與aba兩種空間異構(gòu)體）以及abc型。其中，a、b、c代表不同種類的脂肪酸。aaa型表示三個(gè)脂肪酸完全相同；aab型表示有兩個(gè)相同的脂肪酸；abc型則表示三個(gè)脂肪酸均不相同。

在質(zhì)譜分析中，由于從甘油骨架的sn-2位斷裂一個(gè)脂肪酸所需能量高于從sn-1或sn-3位斷裂，因此可通過APCI質(zhì)譜圖中碎片離子峰的強(qiáng)度與質(zhì)荷比規(guī)律，判斷甘油三酯的相對(duì)分子質(zhì)量及其脂肪酸組成。在特定實(shí)驗(yàn)條件下，甘油三酯的APCI質(zhì)譜圖中通常會(huì)同時(shí)出現(xiàn)強(qiáng)度較高的準(zhǔn)分子離子峰 [M+H]?和失去一個(gè)脂肪酸形成的碎片離子峰 [M+H?脂肪酸]?。通過比較不同碎片離子峰的相對(duì)強(qiáng)度，可推斷被斷裂的脂肪酸在甘油骨架上的具體位置（sn-1/3或sn-2）。

為進(jìn)一步確認(rèn)保留時(shí)間與等碳數(shù)的對(duì)應(yīng)關(guān)系即甘油三酯的色譜保留時(shí)間，將單四極桿質(zhì)譜檢測(cè)器聯(lián)入色譜系統(tǒng)。樣品經(jīng)色譜柱分離后，通過三通分流：一路流入ELSD，另一路進(jìn)入MS。利用分流閥調(diào)節(jié)兩路流速，使柱后流出物以接近1:1的比例分別進(jìn)入兩種檢測(cè)器。通過APCI正離子模式下的準(zhǔn)分子離子峰與碎片離子峰判斷甘油三酯的脂肪酸組成與位置分布，并證實(shí)了甘油三酯的保留時(shí)間隨著ECN的增大而增大，在某ECN的出峰段能夠檢測(cè)到對(duì)應(yīng)ECN的甘油三酯組分，顯示了ECN定性方法的可靠性。如圖3中二亞麻酸亞油酸甘油酯（LiLeLe），準(zhǔn)分子離子峰[M+H]+為875.8，而碎片離子峰[M+H-脂肪酸]+有2個(gè)，分別為595.2和597.3，兩者相差280.6和278.5，因此可以判斷sn-1或sn-3位為L(zhǎng)e（亞麻酸278.43）或Li（亞油酸280.44）。

圖3. 大豆油甘油三酯（二亞麻酸亞油酸甘油三酯LiLeLe）TIC圖

五、總結(jié)

本研究采用HPLC-ELSD/MS聯(lián)用技術(shù)，成功對(duì)植物油中的甘油三酯進(jìn)行了分離與鑒定。結(jié)果表明，該方法能有效解析甘油三酯的組成，并通過質(zhì)譜數(shù)據(jù)驗(yàn)證了等效碳數(shù)（ECN）與色譜保留行為的對(duì)應(yīng)關(guān)系。本方法可靠、高效，為植物油的質(zhì)量控制與真實(shí)性鑒別提供了實(shí)用分析手段。